Nippon Genetics Bambanker Direct 無血清無需離心細胞凍存液

• 可在-80°C或-196°C的溫度下長期凍存細胞

• 非常適合雜交瘤細胞和高通量（HTP）應用

• Bambanker Direct可以直接加到細胞中--無需洗滌且無需離心

• 細胞復蘇后的活率高

• 即用型冷凍介質–無需程序或順序降溫冷凍

• 無血清–無污染風險

• 保質期長

天生為了雜交瘤（Born for hybridomas）

某些細胞類型（例如雜交瘤）對過度處理和操縱表現(xiàn)出更高的敏感性。 在長期儲存和凍融循環(huán)后，這些細胞通常表現(xiàn)出更高的死亡率或不想要的分化。 Bambanker Direct正是針對這些類型的細胞而開發(fā)的，以提供嚴格的環(huán)境控制。 通過取消離心步驟，現(xiàn)在可以在添加新型冷凍保護劑Bambanker Direct后立即冷凍細胞以長期保存。 只需將Bambanker Direct一對一地添加到培養(yǎng)板孔中，然后直接放入冰箱即可。 與原始Bambanker一樣，Direct版本也沒有血清，因此對于動物來源的血清可能是一個問題的細胞來說非常有用。 通過使用Bambanker Direct，雜交瘤細胞可在-80°C長期保存后復蘇率高達100％。

血清增加了長期儲存的差異（Serum adds variation to long-term storage）

所有BambankerTM產品均不含血清。含有血清的冷凍保存培養(yǎng)基具有回收率波動和成分不確定的缺點。凍存于含血清的培養(yǎng)基中的細胞的實驗可重復性可能會受到批次之間血清差異的影響，因為蛋白質和其他生物分子的組成和濃度會隨每批血清而變化。解凍和使用這種含血清培養(yǎng)基的細胞時，可能會導致問題。因為BambankerTM的每種成分都經(jīng)過精確定義，因此您可以放心，在不同時間存儲的細胞都將有一致的效率。

BambankerTM可防止不期望的分化（BambankerTM prevents undesired differentiation）

不期望的細胞分化也可能是冷凍細胞長期保存的一個問題。 所有Bambanker試劑均旨在大程度地減少此問題。 對于特別麻煩的細胞，Bambanker不含DMSO的配方經(jīng)過特殊配制，可防止可能與含DMSO的冷凍保存試劑相關的問題。 因此，請加入越來越多的實驗室的選擇，使用Bambanker保護其細胞系！

多能干細胞的細胞活力和ALP染色 

                    上排：解凍兩天后檢測到大量細胞。 解凍后細胞沒有形態(tài)變化 

                    下排：BambankerTM不會引起細胞分化，因為所有凍結的干細胞仍會產生高水平的堿性磷酸酶，這是多能干細胞的報告基因

細胞凍存液家族（Family of BambankerTM）

Bambanker 細胞凍存液-細胞凍存、解凍操作步驟

?凍存操作步驟：慢凍

①從細胞培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)中處于對數(shù)增殖期的細胞?！鶅龃鎸?shù)增殖期的細胞，是可以確保細胞良好生存率中最重要的一點。 

②使用部分細胞用臺盼藍染色（檢測活率）并計數(shù)細胞數(shù)量。 

③將含細胞的培養(yǎng)基移至離心管中，在合適條件（低離心力，必要低溫）下進行離心。 

④去除上清液后，將細胞沉淀通過輕柔旋渦操作進行懸浮。 

⑤每個凍存管中細胞數(shù)要保持規(guī)定濃度，然后再添加凍存液。 （每 1mLBambanker凍存液可凍存 5×105～1×107 個細胞）※⑤之后的操作步驟盡可能快速完成。另外，Bambanker凍存液從冷藏柜取出后，直接使用，無須平衡室溫，盡快進行保存處理 。

⑥無需預冷細胞懸浮液，直接置于-80℃下保存。 

⑦保存液氮時，先在-80℃保存 12 小時（超過一晚），待狀態(tài)穩(wěn)定后在移至液氮中保存?！D移細胞時請盡快完成操作。 

?解凍操作步驟：快融 

①在 37℃恒溫箱（或者37℃水浴鍋）等設備中解凍細胞，確認凍存管中液體融解?！瞬僮餍柩杆龠M行。因為細胞在解凍過程過極易受到損壞。

②將溶解的細胞液轉移到含有培養(yǎng)基的15ml無菌離心管中，混合后在規(guī)定條件下進行離心 （比如：300～400×g） 

③去除上清液后，加入少量培養(yǎng)基，將細胞沉淀通過輕柔旋渦操作進行懸浮。 

④混勻后，取出其中一部分細胞用臺盼藍染色（檢測活率）并計數(shù)細胞數(shù)量。

⑤將混勻的細胞懸液轉移至培養(yǎng)容器中，細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)。

常見問題（FAQ）

Q1. Bambanker凍存液可以使用的最小體積是多少？

對于1*106個細胞，建議使用1 mL，對于較少的細胞，您可以減少Bambanker的用量。 例如，對于5×105，請使用0.5 mL。

Q2. Bambanker凍存液是否包含DMSO？

除Bambanker DMSO-Free（BBF01）外，Bambanker的其他三種均包含DMSO。

Q3. 復蘇培養(yǎng)時，我們可以在不進行細胞洗滌的情況下直接在培養(yǎng)基中使用解凍的細胞嗎？

 是的，您不需要清洗步驟。

Q4. 可以將在Bambanker中冷凍的細胞用于提取RNA嗎？

可以。 但是請注意，每個試管中的細胞數(shù)少（1*106個細胞）可能會導致分離出的RNA少。

Q5. 我們可以使用Bambanker進行PBMC的冷凍保存嗎？

可以，

PBMC凍存的一個案例：

實驗方案：

i）從健康人的血液中分離出PBMC

ii）PBMC在Bambanker（標準版）中冷凍，并在-80°C和-196°C（液氮）中以1×10 ^ 6細胞/個保存12個月。 1mL Bambanker 1mL等分試樣

iii）冷凍后十二個月，快速融化細胞并測量細胞數(shù)，然后使用包被抗CD3抗體的T-25培養(yǎng)瓶和含IL-2（700 U / mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。在第5、6和7天測量細胞計數(shù)，并在培養(yǎng)的第7天進行流式細胞術。

實驗結果：

在-80°C下保存12個月，回收率59.5％；存活率88.9％

儲存在液氮中（-196°C）保存12個月，回收率63.9％；存活率87.3％

回收率=解凍后完整細胞數(shù)/最初凍存的細胞數(shù)；存活率=在設定的檢測時間點，通過臺盼藍測定的活細胞在總細胞中所占的百分比。

Q6. 您建議如何處理特別脆弱/敏感的細胞？

冷凍技巧：冷凍敏感細胞的最佳方法是將細胞放入Bambanker（選擇合適的類型）中，并在處理過程中將其保持在4°C。將它們盡可能快地放入-80°C的冰箱中24h。然后，將細胞儲存在-80°C或將冷凍的細胞轉移至液氮中。

解凍技巧：將小瓶放入37°C水浴中，直到內容物融化為止。然后應立即將細胞轉移至大量預熱的培養(yǎng)基中-對于最敏感的細胞類型（干細胞，原代細胞），逐滴添加以保持活力。盡管某些細胞可以通過離心沉淀，然后再用移液器輕輕重懸，然后添加到裝有預熱生長培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中，但對于大多數(shù)敏感細胞類型，將它們融化后直接移入培養(yǎng)瓶中的操作更為溫和。第二天進行培養(yǎng)基更換，以除去任何殘留的防凍劑。

Q7. 我們可以使用Bambanker冷凍保存整個類器官嗎？

是的，Bambanker和Bambanker HRM是您的選擇。 兩者均可提供超過70％的恢復率。 我們建議每個冷凍管使用少量類器官（低于20 mg）。 我們還建議您先將類器官在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘，然后再冷凍。 將正常Bambanker用于類器官，將Bambanker HRM用于人類臨床試驗或人類組織衍生的類器官。

Q8. Bambanker可以用于果蠅嗎？

只要是凍存單個細胞，就沒有問題。 我們沒有凍存整個生物體的經(jīng)驗。

Q9.我可以使用Bambanker凍存受感染細胞中的病毒嗎？

只要細胞保持健康，這沒問題。

Q10. 我可以直接使用Bambaker而不用將其恢復室溫（RT）嗎？

沒問題，可以直接使用。

Q11. 如何使用Bambanker提高類器官的生存率？ 我們使用20毫克的胃和結腸組織。

您可以將正常Bambanker用于動物組織。 另外，我們建議將組織細化到20毫克以下。 您也可以在冷凍之前將組織在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘。

Q12. 為什么我使用了Bambanker來保存細胞，但是存活率依然不高？

請凍存前確保細胞處于生長對數(shù)期，并且凍存時細胞數(shù)目控制在5×105~1×107/mL凍存液。

Q13. 我們實驗室已經(jīng)有固定的凍存程序了，如果換了你們的Bambanker，可以還繼續(xù)用原來程序降溫的方法凍存嗎？

雖然本產品可以無需程序降溫凍存細胞，但如果通過程序降溫盒等適當控制了溫度下降的速度，效果更佳（如虎添翼）。

Q14. 哪些細胞株（系）適合使用Bambanker來進行細胞冷凍保存？

幾乎所有細胞株（系）都可以使用Bambanker進行凍存。對于較為寶貴的ES/iPS細胞的保存尤其適用。上所列舉的細胞系均已經(jīng)過測試驗證。

但也并不排除可能有某些細胞株是不適合使用Bambanker來進行凍存的，用戶在沒有確認是否可使用時，建議在進行正式細胞凍存之前先進行預實驗。

Q15. 無血清凍存液相比傳統(tǒng)含血清凍存液有什么優(yōu)勢？

無血清凍存液因不含有動物血清，質量更穩(wěn)定，批間差更?。煌瑫r未知生物成分或感染性物質污染細胞的幾率也極低，尤其對于ES/iPS細胞等有可能用于再生醫(yī)療的細胞安全得以嚴格保障；可以直接凍存無血清培養(yǎng)的細胞，免去無血清再馴化的步驟；另外Bambanker無血清細胞凍存液不需要像傳統(tǒng)的血清凍存液那樣需要程序降溫，減少了用戶的繁瑣操作，節(jié)省了時間。

Q16. Bambanker在冷凍保存細胞的過程中起什么作用？

無血清細胞凍存液使用了DMSO（DMSO-Free除外）等作為保護劑，在凍存細胞時能以1℃/min左右的溫度下降而逐漸凍存，在此過程中，細胞內的水分子被置換成保護劑，抑制胞內和細胞周邊的冰晶的形成，防止細胞膜和細胞器結構損傷，防止蛋白變性。