No

預(yù)混劑 + H2O

終體積

(mL)

磷酸鹽

濃度 (M)

pmoles 磷酸鹽

in 50 mL

1

200mL + 0mL

200

40

2,000

2

160mL + 40mL

200

32

1,600

3

120mL + 80mL

200

24

1,200

4

80mL + 120mL

200

16

800

5

60mL + 140mL

200

12

600

6

40mL + 160mL

200

8

400

7

20mL + 180mL

200

4

200

8

0mL + 200mL

200

0

0

如果發(fā)生沉淀，在 H2O 中對(duì)樣品進(jìn)行系列稀釋，運(yùn)行試驗(yàn)并測(cè)定無(wú)沉淀孔的稀釋因子。使用稀釋樣品重復(fù)測(cè)定。

酶反應(yīng)緩沖液。由于任何外源性游離磷酸鹽均會(huì)干擾試驗(yàn)，因此確保試驗(yàn)中使用的蛋白制備液、反應(yīng)緩沖液和實(shí)驗(yàn)室器具不應(yīng)含有游離磷酸鹽非常重要。這可以通過向緩沖液中加入工作試劑并測(cè)量顏色形成來方便地檢查。

液體處置。含量測(cè)定混合物含 0.4 M 硫酸。建議在處置前用等體積的 1 NNaOH 中和廢液。

數(shù)據(jù)分析

以 OD620 nm 對(duì)磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品濃度作圖。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品磷酸鹽濃度。

文獻(xiàn)

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高通量篩選

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蛋白質(zhì)和 DNA 中的磷酸酶、脂肪酶/磷脂、核苷三磷酸酶和磷酸鹽分析

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技術(shù)說明

孔雀綠磷酸鹽檢測(cè)試劑盒已經(jīng)過優(yōu)化和配制，以提供靈敏、方便和穩(wěn)健的定量測(cè)定從酶反應(yīng)和天然來源中釋放的游離磷酸鹽。試劑盒的關(guān)鍵特征如下：

試劑非常穩(wěn)定。由于我們的創(chuàng)新配方，不會(huì)發(fā)生試劑沉淀。因此，測(cè)定前無(wú)需過濾試劑，這是其他市售試劑盒的常見要求。

安全。非放射性試驗(yàn)。

高靈敏度和寬檢測(cè)范圍：僅檢測(cè) 1.6 pmole 磷酸鹽和 0.02 M 至 40 M 磷酸鹽。

快速方便：均勻的“混合和測(cè)量”測(cè)定法可在 20 min 內(nèi)定量測(cè)定游離磷酸鹽。

與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室和 HTS 格式兼容：可在試管或微孔板、分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀上進(jìn)行測(cè)定。

在 96 孔和 384 孔板中觀察到穩(wěn)健且適用于 HTS：Z' 因子為 0.7-0.9。可在 HTS 液體處理系統(tǒng)上輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。