arcticzymes 80400-100說(shuō)明書(shū)

PCR Decontamination Kit

PCR去污試劑盒

PCR去污試劑盒可去除PCR預(yù)混液中的污染DNA，而不會(huì)降低PCR靈敏度。

• dsDNase的雙鏈特異性允許用引物和探針進(jìn)行凈化。
• 有效用于終點(diǎn)PCR和基于探針的qPCR。
• 污染細(xì)菌DNA降至檢測(cè)限以下。
• 快速簡(jiǎn)便的協(xié)議。

在不降低靈敏度的情況下對(duì)主混合物進(jìn)行凈化一直是一個(gè)挑戰(zhàn)。特別是當(dāng)靶向少量DNA時(shí)，污染DNA是一個(gè)主要問(wèn)題。由去污方案引起的qPCR測(cè)定中的任何靈敏度損失都是不可接受的。

套件內(nèi)容：

• DTT（滅活援助）
• dsDNase

協(xié)議

圖1：PCR去污試劑盒方案

1. 將引物和探針與主混合物和試劑盒內(nèi)容混合
2. 在37?C孵育20分鐘
3. 在60?C下滅活20分鐘
4. 添加模板并運(yùn)行qPCR

在DTT存在下，dsDNase在60℃時(shí)不可逆地失活，確保滅活后添加的任何模板都能安全地消化。

從20μl反應(yīng)中去除污染DNA的方案，但可以通過(guò)調(diào)整試劑盒內(nèi)容物的體積來(lái)放大或縮小。

500 pg untreated50 pg untreated5 pg untreated500 fg untreated50 fg untreatedNTC untreated500 pg decontaminated50 pg decontaminated5 pg decontaminated500 fg decontaminated50 fg decontaminatedNTC decontaminated5101520253035404502,5005,0007,50010,00012,50015,000Cycles14500 pg untreated:3450 pg untreated:-45 pg untreated:-5500 fg untreated:-1350 fg untreated:12NTC untreated:1500 pg decontaminated:1650 pg decontaminated:-125 pg decontaminated:-750 fg decontaminated:-9NTC decontaminated:22

圖2：未處理和去污染的qPCR 2x主混合物用于分析具有5個(gè)步驟的大腸桿菌gDNA 10倍系列稀釋。包括NTC樣品，并且連續(xù)稀釋的所有圖顯示平均三次重復(fù)。

使用PCR去污試劑盒進(jìn)行治療不會(huì)降低PCR的靈敏度。即使稀釋DNA，Cq水平也沒(méi)有顯著改變（圖2）。

套件內(nèi)容

• DTT（滅活援助）
• dsDNase（100個(gè)反應(yīng)）

儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存在-20?C。
樣品材料：該試劑盒可用于減少普通PCR和基于探針的qPCR混合物中的污染DNA。對(duì)于一些基于SYBR的qPCR混合物也是有效的。
質(zhì)量控制：測(cè)試試劑盒中是否存在RNase。

出版物

1. 使用二元脫氧核糖核酸酶?jìng)鞲衅鞫嘀貦z測(cè)廣泛耐藥結(jié)核病。
   Bengtson，HN; Homolka，S。; Niemann，S。; Reis，AJ; 達(dá)席爾瓦，PE; Gerasimova，YV; Kolpashchikov，DM; Rohde，KH（2017）
   Biosens Bioelectron 2017,94,176-183。