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AR Luciferase Reporter MDA-MB-453 Stable Cell Line

AR熒光素酶報(bào)告基因MDA-MB-453穩(wěn)定細(xì)胞系

描述： 

AR響應(yīng)性熒光素酶報(bào)告基因MDA-MB-453穩(wěn)定細(xì)胞系來(lái)自人乳腺癌，并在AR反應(yīng)元件的控制下穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因。該細(xì)胞系是一種理想的細(xì)胞模型，用于監(jiān)測(cè)由激素治療，強(qiáng)制基因表達(dá)和基因敲除引發(fā)的雄激素受體途徑的激活。

原理

雄激素受體（AR）在男性生殖器官的發(fā)育中起關(guān)鍵作用。當(dāng)被刺激激活時(shí)，AR從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到核中，然后結(jié)合DNA識(shí)別位點(diǎn)并調(diào)節(jié)基因表達(dá)。Signosis已建立了AR熒光素酶報(bào)告基因穩(wěn)定細(xì)胞系，其中熒光素酶活性與AR的活性特異性相關(guān)。因此，細(xì)胞系可用作監(jiān)測(cè)由刺激治療引發(fā)的AR的激活的報(bào)告系統(tǒng)，強(qiáng)制基因表達(dá)和/或基因敲低。通過(guò)轉(zhuǎn)染AR熒光素酶報(bào)道載體與G418表達(dá)載體，然后G418選擇建立細(xì)胞系。隨后篩選G418抗性克隆，以顯示依托泊苷誘導(dǎo)的熒光素酶活性。選擇具有zui高折疊誘導(dǎo)（22倍）的克隆并擴(kuò)增以產(chǎn)生該穩(wěn)定的細(xì)胞系。

TF熒光素酶報(bào)告原理。  TF熒光素酶報(bào)道穩(wěn)定細(xì)胞株利用人工啟動(dòng)子構(gòu)建體來(lái)驅(qū)動(dòng)熒光素酶表達(dá)。啟動(dòng)子區(qū)域可以由順式元件TF結(jié)合位點(diǎn)的多個(gè)重復(fù)序列，來(lái)自已知TF下游基因的啟動(dòng)子區(qū)域的DNA片段或含有推定/已知的TF結(jié)合位點(diǎn)的DNA片段組成。TF可以通過(guò)細(xì)胞外刺激或通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活幾種方式。一旦激活，TF易位于細(xì)胞核，并經(jīng)常與相關(guān)因子相互作用以驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)。一旦熒光素酶表達(dá)，其可以在酶測(cè)定中產(chǎn)生光，并且測(cè)量的光量與TF活化的水平正相關(guān)。

數(shù)據(jù)

分析雄激素受體途徑記錄MDA-MB-453穩(wěn)定細(xì)胞系對(duì)刺激的響應(yīng)。 將細(xì)胞用包含10％FBS的DMEM在96孔板上接種過(guò)夜。然后在DMEM和0.1％FBS中分別用或不用20nM DHT處理細(xì)胞16小時(shí)。

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